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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)/紫外分光光度計(jì)，是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段，是對(duì)實(shí)驗(yàn)室里zui常用的對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的儀器。

紫外分光光度計(jì)在檢測(cè)的時(shí)候，首先選擇合適的波長(zhǎng)范圍，目前比較的精密紫外分光光度計(jì)型號(hào)有PE的超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，島津的UV1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，安捷倫的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。國(guó)產(chǎn)較好的可以和島津UV1800做比較的有上海奧析生產(chǎn)的UV1902PC和UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，采用的是濱松無(wú)臭氧環(huán)保型氘燈，快捷版操作軟件和操作界面，也是的一款。

廣泛應(yīng)用于冶金、機(jī)械、化工、醫(yī)療衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)、生物化學(xué)、環(huán)境保護(hù)、食品、材料科學(xué)等領(lǐng)域的生產(chǎn)、教學(xué)和科研工作中，特別適合對(duì)各種物質(zhì)進(jìn)行定量及定性分析，可測(cè)元素有100多種，其中有磷。

磷是飼料中的一種營(yíng)養(yǎng)素，是飼料的構(gòu)成成分，是動(dòng)物必需的常量礦物元素。總磷是反映飼料中磷含量水平的指標(biāo)。對(duì)單胃動(dòng)物來(lái)說(shuō)，總磷中含有的植酸磷是其所不能利用的，飼料中可以被動(dòng)物利用的部分稱為有效磷。對(duì)反芻動(dòng)物來(lái)說(shuō)，由于消化道中存在分解植酸磷的植酸酶，因此可根據(jù)原料中總磷的含量和動(dòng)物的 營(yíng)養(yǎng)需要量來(lái)設(shè)計(jì)配方。

用過(guò)硫酸鉀（或硝酸-高氨酸）為氧化劑 ，將未經(jīng)過(guò)濾的水樣消解，用鉬酸銨分光光度測(cè)定總磷的方法。總磷包括溶解的、顆粒的、有機(jī)的和無(wú)機(jī)磷 。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地面水、污水和 工業(yè)廢水。取25mL試料，本標(biāo)準(zhǔn)的zui低檢出濃度為0.01mg/L，測(cè)定上限為0.6mg/L。在酸性條件下，砷、鉻、硫干擾測(cè)定。

在中性條件下用過(guò)硫酸鉀（或硝酸-高氨酸）使試樣消解，將所含磷全部氧化為 正磷酸鹽。在酸性介質(zhì)中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應(yīng)，在銻鹽存在下生成磷鉬雜多酸后，立即被抗壞血酸還原，生成藍(lán)色的絡(luò)合。

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有說(shuō)明外，均應(yīng)使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或?qū)I(yè)標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的 分析試劑和蒸餾水或同等純度的水。

 硫酸(H2SO4)，密度為1.84g/mL。

 硝酸(HNO3)，密度為1.4g/mL。

 高氯酸(HClO4)， 優(yōu)級(jí)純，密度為1.68g/mL。

 硫酸(H2SO4)，1+1。

硫酸，約c(1/2H2SO4)=1mo1/L：將27mL硫酸(3.1)加入到973mL水中。

 氫氧化鈉(NaOH)，1mo1/L溶液：將40g氫氧化鈉溶于水并稀釋至1000mL。

 氫氧化鈉(NaOH)，6mo1/L溶液；將240g氫氧化鈉溶于水并稀釋至1000mL。

 過(guò)硫酸鉀，50g/L溶液：將5g過(guò)硫酸鉀(K2S2O8)溶解干水，并稀釋至100mL。

 抗壞血酸，100g/L溶液：溶解10g抗壞血酸(C6H8O6)于水中，并稀釋至100mL。此溶液貯于棕色的試劑瓶中，在冷處可穩(wěn)定幾周。如不變色可

長(zhǎng)時(shí)間使用。

 鉬酸鹽溶液：溶解13g 鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]于100mL水中。溶解0.35g酒石酸銻鉀KSbC4H4O7· 1/2 H2O]于100mL水中。在不斷攪拌

下把 鉬酸銨溶液徐徐加到300mL硫酸中，加酒石酸銻鉀溶液并且混合均勻。此溶液貯存于棕色試劑瓶中，放在約4攝氏度處可保存二個(gè)月。

 濁度一色度補(bǔ)償液：混合兩個(gè)體積硫酸和一個(gè)體積抗壞血酸溶液。使用當(dāng)天配制。

 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：稱取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氫鉀(KH2PO4)，用水溶解后轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，加入大約

800mL水、加5mL硫酸用水稀釋至標(biāo)線并混勻。1.00mL此標(biāo)準(zhǔn)溶液含50.0μg磷。本溶液在玻璃瓶中可貯存至少六個(gè)月。

 磷標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：將10.0mL的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線并混勻。1.00mL此標(biāo)準(zhǔn)溶液含2.0μg磷。使用當(dāng)天配制。

 酚酞，10g/L溶液：0.5g酚酞溶于50mL95%乙醇中。

 儀器 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備和下列儀器。

 醫(yī)用手提式蒸氣消毒器或一般壓力鍋(1.1～1.4kg/cm2)。

50mL具塞(磨口)刻度管。

 分光光度計(jì)。注：所有玻璃器皿均應(yīng)用稀鹽酸或 稀硝酸浸泡。

 采樣和樣品

采取500mL水樣后加入1mL硫酸調(diào)節(jié)樣品的pH值，使之低于或等于1，或不加任何試劑于冷處保存。注：含磷量較少的水樣，不要用塑

料瓶采樣，因易磷酸鹽吸附在塑料瓶壁上。

試樣的制備：取25mL樣品于具塞刻度管中。取時(shí)應(yīng)仔細(xì)搖勻，以得到溶解部分和懸浮部分均具有代表性的試樣。如樣品中含磷

濃度較高，試樣體積可以減少。

分析步驟：

 空白試樣按的規(guī)定進(jìn)行空白試驗(yàn)，用水代替試樣，并加入與測(cè)定時(shí)相同體積的試劑。 測(cè)定 ：消解：

 過(guò)硫酸鉀消解：向試樣中加4mL過(guò)硫酸鉀，將具塞刻度管的蓋塞緊后，用一小塊布和線將玻璃塞扎緊(或用其他方法固定)

，放在大燒杯中置于高壓蒸氣消毒器(4.1)中加熱，待壓力達(dá)1.1kg/cm2，相應(yīng)溫度為120℃時(shí)、保持30min后停止加熱。待壓力表讀數(shù)降至零后

，取出放冷。然后用水稀釋至標(biāo)線。注：如用硫酸保存水樣。當(dāng)用 過(guò)硫酸鉀消解時(shí)，需先將試樣調(diào)至中性。

 硝酸- 高氯酸消解：取25mL試樣于錐形瓶中， 加數(shù)粒玻璃珠，加2mL 硝酸在電熱板上加熱濃縮至10mL。冷后加5mL硝

酸，再加熱濃縮至10mL，放冷。加3mL高氯酸，加熱至高氯酸冒 白煙，此時(shí)可在錐形瓶上加小漏斗或調(diào)節(jié)電熱板溫度，使消解液

在錐形瓶?jī)?nèi)壁保持回流狀態(tài)，直至剩下3～4mL，放冷。加水10mL，加1滴 酚酞指示劑。滴加 氫氧化鈉溶液至剛呈微紅色

，再滴加 硫酸溶液使微紅剛好退去，充分混勻。移至具塞刻度管中(4.2)，用水稀釋至標(biāo)線。

注：①用硝酸- 高氯酸消解需要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。 高氯酸和有機(jī)物的混合物經(jīng)加熱易發(fā)生危險(xiǎn)，需將試樣先用硝酸消解，然后再加入硝－

酸高氯酸進(jìn)行消解。②絕不可把消解的試作蒸干。③如消解后有殘?jiān)鼤r(shí)，用濾紙過(guò)濾于具塞刻度管中，并用水充分清洗錐形瓶及濾紙，一并移

到具塞刻度管中。 水作中的有機(jī)物用 過(guò)硫酸鉀氧化不能*破壞時(shí)，可用此法消解。發(fā)色 ：分別向各份消解液中加入1mL抗壞血

酸溶液混勻，30s后加2mL 鉬酸鹽溶液充分混勻。注：①如試樣中含有 濁度或 色度時(shí)，需配制一個(gè)空白試樣(消解后用水稀釋

至標(biāo)線)然后向試料中加入3mL濁度——色度補(bǔ)償液，但不加抗壞血酸溶液和鉬酸鹽溶液。然后從試料的 吸光度中扣除空白試料的吸光

度。②砷大于2mg/L干擾測(cè)定，用硫代硫酸鈉去除。硫化物大于2mg/L干擾測(cè)定，通 氮?dú)馊コｃt大于50mg/L干擾測(cè)定，用亞硫酸鈉去除。

分光光度測(cè)量：室溫下放置15min后，使用 光程為10mm或30mm比色皿，在700nm波長(zhǎng)下，以水做參比，測(cè)定吸光度。扣除空白試驗(yàn)的吸

光度后，從工作曲線上查得磷的含量。注：如顯色時(shí)室溫低于13℃，可在20～30℃水浴中顯色15min即可。

工作曲線的繪制 取7支具塞刻度管(4.2)分別加入0.0，0.50，1.00，3.00，5.00，10.0，15.0mL 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.14)。加水至50mL。然后按測(cè)定步驟進(jìn)行處理。以水做參比，測(cè)定吸光度。扣除空白試驗(yàn)的吸光度后，和對(duì)應(yīng)的磷的含量繪制工作曲線。 結(jié)果的表示： 總磷含量以C(mg/L)表示

，按下式計(jì)算：C=m/V 式中：m——試樣測(cè)得含磷量，μg； V——測(cè)定用試樣體積，mL。