紫外分光光度計就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區任意選擇不同波長的光。物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量。
一、紫外分光光度計的光度重復性
紫外可見分光光度計國家計量檢定規程規定, 光度重復性要測試3 次, 取3 次中的較大較小之差作為光度重復性。光度重復性的測試方法是選定一個標準樣品, 由同一個操作者,進行3~5 次測試, 再計算光度重復性。具體操作方法為: 儀器冷態開機, 預熱0. 5h 后, 對標準樣品或使用者自選的樣品進行光譜掃描, 而后在譜圖上選擇幾個特征吸收峰, 檢查在選定的測量次數內, 各個峰值的之差即為光度重復性。人們經常將光度準確度和光度重復性在一次操作中完成。
儀器穩定可靠, 其中很重要的一點就是光度重復性好。可以設想: 一臺紫外可見分光光度計, 它的功能很強大、自動化程度很高、外形美觀、價格合理, 但它測出的數據不能重復, 那肯定不是好儀器。
二、影響光度重復性的主要因素
影響紫外可見分光光度計光度重復性的主要因素有以下幾種。
1.光源系統
光源系統即指燈泡和電源。如果氘燈或鎢燈燈泡本身的質量不好, 即使電源很好, 氘燈或鎢燈發出的光通量肯定不穩。這樣, 紫外可見分光光度計就不可能得到好的、穩定的測試結果。如果氘燈或鎢燈的燈泡很好, 但其電源不穩, 那么光源系統(燈泡) 發出的光通量也不可能穩, 也不可能得到好的光度重復性。
2.光電轉換器系統
光電轉換器系統包括光電轉換元件及其供電電源; 光電轉換元件是將光信號轉換成電信號的關鍵元件。不管紫外可見分光光度計的其他元部件 多好, 如果光電轉換元件不好, 就不可能得到好的光度重復性。
3.如果光電轉換元件很好, 其供電電源不好, 電源一直在波動或漂移, 也不可能得到好的光度重復性。因此, 紫外可見分光光度計的制造者和使用者一定要高度重視光電轉換器系統對光度重復性的影響。