分光光度計是實驗室、科研機構(gòu)、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、食品廠、飲用水廠等機構(gòu)*檢驗設(shè)備。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計的顯色反應(yīng)一般要求影響顯色反應(yīng)因素選擇性好、靈敏度高,生成的有色化合物性質(zhì)穩(wěn)定,顯色劑與有色物顏色反差大,顯色反應(yīng)要易于控制顯色劑用量、反應(yīng)液的酸堿度(pH)、反應(yīng)溫度、顯色反應(yīng)時間干擾離子的影響。
1、分光光度計的顯色反應(yīng)一般要求:
(1)選擇性好:顯色劑較好只與一種被測組分起顯色反應(yīng);
(2)靈敏度高:靈敏度高有笪微量組分的測定;
(3)有色化合物性質(zhì)穩(wěn)定:確保前后測定準(zhǔn)確.
(4)顯色劑與有色物顏色反差大:兩者較大吸收波長之差應(yīng)大于60nm;
(5)顯色反應(yīng)要易于控制:結(jié)果的確保實驗再現(xiàn)性.
2、影響分光光度計顯色反應(yīng)的主要因素:
(1)顯色劑用量:通過實驗來確定較適用量;
(2)反應(yīng)液的酸堿度(pH):溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.
(3)反應(yīng)溫度:不同的顯色反應(yīng)需要不同的反應(yīng)溫度,一般顯色反應(yīng)可在室溫下完成.
(4)顯色反應(yīng)時間:顯色反應(yīng)的速度有快有慢.
(5)干擾離子的影響:應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其影響。