紫外分光光度法是根據物質的吸收光譜,來研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度計可以在紫外可見光區任意選擇不同波長的光。物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量。
與紫外可見分光光度計光度準確度相關的七大因素:
①儀器的雜散光大小;
②儀器的光度噪聲;
③儀器的基線平直度;
④儀器的光譜帶寬;
⑤試樣的來源,包括樣品的制備,取樣的方法;
⑥樣品的制備,包括稱量、容量、溶劑、試劑、pH值、時間、溫度等;
⑦比色皿的狀況等。
由此可知,光度準確度或吸光度誤差,是一個綜合性的技術指標。要使用紫外可見分光光度計測得準確可靠的數據,必須注重上述幾個方面的影響。否則,不可能得到準確可靠的數據。特別是在分析測試時,如何選擇(或設定)這些技術指標,非常重要。特別應該指出的是:在給出吸光度誤差,同時也給出透射比誤差時,二者不能相互矛盾。